共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM 是一种非破坏性的光学手术刀，使研究人员能够在不物理切割组织的情况下可视化透皮药物的确切皮肤分布。通过结合激光点扫描和荧光标记，CLSM 可创建高分辨率的逐层图像，揭示药物渗透的确切深度和途径。
CLSM 通过超越简单的“是否进入？”的指标，转变为直观确认“如何进入”，绘制出角质层内细胞间脂质通路等特定转运路线，从而改变了我们评估透皮制剂的方式。
光学切片力学
非破坏性“虚拟切片”
传统显微镜检查通常需要物理切割组织，这可能会导致样本变形。CLSM 利用光学纵向切片来观察皮肤层，而不会造成机械损伤。
通过使用空间针孔滤波，显微镜可以分离特定焦平面的光线。这使得能够生成清晰的光学切片，使研究人员能够完整地观察重构人表皮 (RhE) 模型或切除皮肤的内部。
精确深度分析
CLSM 的主要价值在于其能够以受控的增量进行深层组织扫描。该系统可以以低至10 μm的步长扫描皮肤深度。
此功能可用于构建详细的垂直剖面。研究人员通常可以观察到 0 至 20 微米之间的药物分布，从而有效地将角质层与更深的表皮和真皮区分开来。
绘制分布途径
追踪荧光标记
为了可视化分布，药物会与荧光标记物配对，例如5-FAM。CLSM 检测这些信号以精确定位活性成分的位置。
这种荧光提供了药物积累位置的视觉图。它将看不见的化学浓度转化为可观察的数据点，验证了给药载体的性能。
可视化转运路线
CLSM 对于识别具体的进入机制至关重要。图像可以区分药物是穿过细胞还是在细胞之间穿行。
例如，CLSM 可以可视化细胞间脂质通路上的信号。这使得研究人员能够确认配方（例如含有药物离子液体的配方）是否有效拓宽了这些物理通道以增强渗透。
理解权衡
深度与分辨率
虽然 CLSM 对皮肤上层提供了卓越的分辨率，但它存在物理深度限制。它最适用于分析角质层和上表皮。
深层组织中的光散射最终会降低信号。对于需要可视化深层真皮吸收的研究，可能需要通过其他组织学方法来补充 CLSM。
依赖标记
CLSM 不是一种无标记技术；它要求药物本身具有荧光或连接到荧光探针。
添加标记物（如 5-FAM）对于可视化是必要的，但会引入一个变量。研究人员必须确保标记物本身不会显著改变所测试药物制剂的渗透特性。
为您的目标做出正确选择
为了最大限度地发挥 CLSM 在您研究中的价值，请根据您的具体开发目标来调整您的分析：
- 如果您的主要重点是制剂功效：使用 CLSM 计算渗透率，并确认药物在角质层内达到了所需的深度。
- 如果您的主要重点是作用机制：专注于细胞间空间的高分辨率成像，以证明您的增强剂成功地靶向了脂质通路。
通过揭示隐藏的渗透途径，CLSM 弥合了理论制剂设计与已证实的生物递送之间的差距。
总结表：
| 特征 | CLSM 工作原理 | 研究效益 |
|---|---|---|
| 成像方法 | 非破坏性光学切片 | 在不进行物理切割的情况下保持组织完整性 |
| 深度分析 | 分步扫描（约 10 μm） | 绘制药物在皮肤层中的精确分布图 |
| 途径追踪 | 荧光标记检测 | 可视化细胞间与跨细胞路线 |
| 目标区域 | 角质层和上表皮 | 验证早期渗透和增强剂功效 |
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参考文献
- Degong Yang, Liang Fang. The molecular design of drug-ionic liquids for transdermal drug delivery: Mechanistic study of counterions structure on complex formation and skin permeation. DOI: 10.1016/j.ijpharm.2021.120560
本文还参考了以下技术资料 Enokon 知识库 .
